高效液相色谱在材料测试中的定性定量方法有(高效液相色谱在材料测试中的定性定量方法有哪些)

高效液相色谱法是利用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填料的色谱柱中，对测试样品进行分离和测定的色谱方法。注入的测试样品由流动相带入色谱柱。各组分在色谱柱中分离并进入检测器进行检测。色谱信号由积分器或数据处理系统记录和处理。

高效液相色谱法有以下方法：

1.定性分析

常用的定性方法主要包括但不限于利用保留时间定性、利用光谱相似性定性、利用质谱检测器提供的质谱信息定性。

利用保留时间定性

保留时间（tR）定义为组分进样到柱后出现该组分最大响应值的时间，即从进样到某一组分色谱峰出现峰所需的时间。时间通常以分钟(min)为单位来衡量，用于反映分离组分的性质差异。通常以相同色谱条件下待测组分与对照品的保留时间是否一致作为待测组分定性测定的依据。

在相同色谱条件下，待测组分的保留时间与对照品的保留时间不应有显着差异；保留时间不同的两个色谱峰属于不同的化合物，但保留时间相同的两个色谱峰可能并不总是可识别的。属于同一化合物，鉴定未知物质时应特别注意。

若改变流动相组成或更换色谱柱类型，待测组分的保留时间仍与对照品一致，可进一步证实待测组分与对照品的保留时间一致。物质是同一种化合物。

当待测成分没有对照品（保留时间tR，1）时，可将样品中的另一种成分或另一种已知成分添加到样品中作为对照品（保留时间tR，2），保留时间（RRT）作为定性（或定位）方法。种类下，除非另有说明，相对保留时间通常是指待测组分的保留时间相对于主成分的保留时间的比值，按下式计算，作为未调整的保留时间，不扣除死区时间。

如果需要计算调整后的保留时间减去死区时间，应在相应品种下注明。

利用光谱相似性进行定性

化合物的全波长扫描紫外-可见区域光谱提供了一些有价值的定性信息。待测成分的光谱与对照品光谱的相似度可用于辅助定性分析。当二极管阵列检测器开启一定波长范围内的扫描功能时，可以获得更多的信息，包括色谱信号、时间、波长的三维色谱图，可用于辅助定性分析和峰纯度分析。

还应该注意的是，具有不同光谱的两个色谱峰代表不同的化合物，但具有相似光谱的两个色谱峰不一定归因于同一化合物。

利用质谱检测器提供的质谱信息来定性

利用质谱检测器提供的色谱峰的分子质量和结构信息进行定性分析，比仅仅利用保留时间或增加光谱相似度进行定性分析，可以获得更多、更可靠的信息。它不仅可以用于已知物质的定性分析。还可以提供未知化合物的结构信息。

2.定量分析

内标法

按照产品正文的规定，精密称取（量取）对照品和内标物，分别配制溶液。准确称取每种物质适量，混合制成对照溶液，用于测定校准因子。注入一定量的样品，记录色谱图。测定对照品和内标物的峰面积或峰高，按下式计算校正系数：

然后取各品种下含内标物的供试品溶液，注入样品，记录色谱图，测定供试品中待测成分与内标物的峰面积或峰高，根据为以下公式：

采用内标法可以避免样品前处理和进样量误差对测定结果的影响。

外标法

按各品种规定，精密称取对照品和供试品，制成溶液，各精密量取，进样，记录色谱，测定对照品的含量溶液和待测物质溶液。对于某种物质的峰面积（或峰高），按以下公式计算含量：

式中符号含义同上。

采用外标法测定时，宜采用手动进样器定量环或自动进样器进样。

带校正因子的主成分自对比法

测量杂质含量时，可采用带有校正因子的主成分自控法。建立方法时，按各品种规定，精密称取（量取）供试品和对照品对照品适量，配制供试品杂质校正因子溶液，注入样品。记录色谱图，然后按下列公式计算待测杂质的校正因子。

还可以准确称取主成分对照品和杂质对照品适量，配制成不同浓度的溶液，进样，记录色谱图，绘制主成分浓度与杂质浓度的回归曲线其峰面积，从而将校正因子计算为主成分回归线的斜率与杂质回归线的斜率之比。

校正因子可以直接加载到每个产品项中，用于校正所测得的杂质峰面积。对于需要校准和计算的杂质，通常以主成分为参考，采用相对保留时间定位，并将其值加载到每个产品项中。向下。

测定杂质含量时，按各品种规定的杂质限量，将供试品溶液稀释成与杂质限量相当的溶液作为对照溶液，进样，记录色谱图，调整纵坐标范围（至噪声）如果需要的话。可接受水平为限度），使对照溶液主成分色谱峰的峰高达到满量程的10%25%左右。除另有规定外，含量小于0.5%的杂质，峰面积测定值的相对标准偏差（RSD）应小于10%；对于含量为0.5%2%的杂质，峰面积测定值的RSD应小于5%；对于含量大于2%的杂质，峰面积测定值的RSD应小于2%。然后，取供试品溶液和对照溶液适量，分别注入。除另有规定外，供试品溶液的记录时间应为主成分色谱峰保留时间的2倍。应测定供试品溶液色谱上各杂质的峰面积，乘以相应的校正因子，与对照品比较。比较溶液主要成分的峰面积，计算出各杂质的含量。

无校正因子主成分自对比法

测量杂质含量时，如果无法获得待测杂质的校正因子，或者可以忽略校正因子，也可以采用不加校正因子的主成分自控法。按上述(3)制备对照溶液，进样，调整纵坐标范围，计算峰面积的相对标准偏差，取供试品溶液和对照品溶液各适量，分别注入样品。除另有规定外，供试品溶液的记录时间应为主成分色谱峰保留时间的2倍。应测定供试品溶液色谱图中各杂质的峰面积，并与对照溶液主要成分的峰面积进行比较。依法计算杂质含量。

面积归一化法

按各产品规定，配制供试品溶液，进样一定量，记录色谱图。测定色谱图上除溶剂峰外的各峰面积和总色谱峰面积，并计算各峰面积占总峰面积的百分比。用于杂质检验时，由于仪器响应的线性限制，峰面积归一化法一般不适用于痕量杂质的检验。测试狗